土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法

产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
产品商标：solarbio
英文名称：Soil neutral invertase (S-NI) activity assay kit
注意：正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC4040
规格：50T/24S
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：660
库存状态：现货
关键词：土壤中性转化酶|土壤中性转化酶活性检测|S-NI|-S-NI活性检测
产品内容：
试剂一：液体100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入30mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
试剂三：液体30mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：粉剂×1 支，4℃保存，10mg 无水葡萄糖。临用前加入1mL 试剂一溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准液备用。

产品简介：
S-NI 在中性条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。
S-NI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm 有特征光吸收，在一定范围内540nm 光吸收增加速率与NI 活性成正比。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水、50 目筛（或更小）、甲苯。

操作步骤：
一、样品处理：
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50 目筛。
二、测定步骤及加样表：
1、分光光度计预热30min，波长调至540nm，蒸馏水调零。
2、标准液的稀释：将10mg/mL 葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04 mg/mL的葡萄糖标准溶液备用。
3、加样表：
试剂名称        测定管      对照管      标准管      空白管
土样（g）         0.1          0.1         -           -
试剂一（μL）       -           800         -         800
试剂二（μL）      800           -           -         -
标准液（μL）       -            -          800         -
甲苯（μL）         20           20          20         20
混匀，37℃准确水浴1h 后，煮沸10min 左右（盖紧，以防止水分散失），流水或冰浴冷却后充分混匀（以保证浓度不变），10000rpm，常温离心10min，取上清。
上清液（μL）      700           700         700        700
试剂三（μL）      300           300         300         300
混匀，煮沸10min 左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，540nm 处蒸馏水调零，记录各管吸光值A，记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

S-A I 活性计算：
1、标准曲线的绘制：
以葡萄糖浓度为x 轴，相应的ΔA 标准为y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b；将ΔA带入公式得到x（mg/mL）
2、S-NI 活性计算
单位定义：37℃每g 土壤每天产生1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
S-NI（U/g）=x×V 酶促÷W÷T=19.68×x÷W。

V 酶促：酶促反应总体积，0.82mL；
W：样本鲜重，g；
T：反应时间：1/24d。

注意事项：
1、如果加入试剂三，煮沸10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清测定吸光度；
2、如果吸光值大于1，可以用试剂一将上清液稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）；若吸光值较小，可以增加上清液体积或者土样鲜重进行测定。