土壤酸性转化酶（S-AI）活性检测试剂盒
微量法
产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
英文名称：Soil acid invertase (S-AI) activity detection kit
产品商标：solarbio
注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC3075
规格：100T/48S
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：1200
库存状态：现货 
关键词：土壤酸性转化酶|土壤酸性转化酶检测|S-AI|S-AI活性检测

产品内容：
试剂一：液体40mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入10mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
试剂三：液体10mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂×1 支，4℃保存，10mg 无水葡萄糖。临用前加入1mL 试剂一溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准液备用。

产品说明：
S-AI 在pH 为4.5~5.0（酸性）条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。
S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm 有特征光吸收，在一定范围内540nm 光吸收增加速率与AI 活性成正比。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水、50 目筛（或更小）、甲苯。

操作步骤：
一、样品处理：
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50 目筛。
二、测定步骤及加样表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至540nm，蒸馏水调零。
2、标准液的稀释：将10mg/mL 葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.4、0.3、0.2、0.1、0.08、0.06 mg/mL的葡萄糖标准溶液备用。
3、加样表：
试剂名称              测定管        对照管           标准管              空白管
土样（g）              0.02           0.02             -                    -
试剂一（μL）            -             160             -                   160
试剂二（μL）           160             -              -                    -
标准液（μL）            -              -             160                   -
甲苯（μL）              4              4              4                     4
       混匀，37℃准确水浴1h 后，煮沸10min 左右（盖紧，以防止水分散失），流水或冰浴冷却后充分混匀（以保证浓度不变），10000rpm，常温离心10min，取上清28μL 与112μL 试剂一混合即将上清液稀释5 倍。
上清稀释液（μL）       140            140                140                 140
试剂三（μL）          60              60                 60                60
混匀，煮沸10min 左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，540nm 处蒸馏水调零，记录各管吸光值A，记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、S-AI 活性计算：
1、标准曲线的绘制：
以葡萄糖浓度为x 轴，相应的ΔA 标准为y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b；将ΔA 带入公式得到x（mg/mL）
2、S-AI 活性计算
单位定义：37℃每g 土壤每天产生1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI（U/g）=x×V 酶促÷W÷T×5=19.68×x÷W。
V 酶促：酶促反应总体积，0.164mL；
W：样本鲜重，g；
T：反应时间：1/24d；
5：上清液稀释倍数

注意事项：
1、如果加入试剂三，煮沸10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清测定吸光度；
2、如果吸光值大于1，可以将上清液再进行稀释；若吸光值较小，可以减少上清液稀释倍数。两种操作均要注意改变公式中的稀释倍数。