土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒

品牌：Solarbio | 货号：BC0270

土壤中性蛋白酶检测试剂盒(分光光度法)说明书

测定意义：土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。S-NPT在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理：中性条件下，S-NPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水
关键词：土壤中性蛋白酶|土壤中性蛋白酶活性检测|中性蛋白酶


产品内容：
试剂一：液体60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入10ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入100uL 试剂七使粉剂润湿，然后加入20ml 试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入50ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的4℃保存。
试剂五：液体10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂六：液体1.5mL×1 支，0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液，4℃保存；
试剂七：液体1.5mL×1 支，4℃保存；

操作步骤：
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
3、样本测定：

试剂名称             测定管             对照管
风干土样（g）       0.02                0.02
试剂一（μL）         100                300
试剂三（μL）         200
混匀后，40℃水浴30min，振荡5-6 次，使土样与反应液充分接触
试剂二（μL）         100                 100
混匀，10000rpm 室温离心10min，取上清液

                      测定管             对照管          标准管
上清液（μL）          150                150
试剂六（μL）                                               150
试剂四（μL）          700                 700             700
试剂五（μL）          150                 150             150
    混匀，40℃水浴20min，680nm 下读取各管吸光值A标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-NPT 活力的计算：
单位定义：每天每g 土样中产生1mg 酪氨酸为一个S-NPT 活力单位。
S-NPT(U/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=48×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管

C 标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；
V 反总：反应体系总体积，0.4mL；
T：反应时间，30min=1/48d；
W：样本质量，0.02g。

相关文献：

《Evaluating the effects of phytoremediation with biochar additions on soil nitrogen mineralization enzymes and fungi》 作者:Manyun Zhang,Jun Wang, Shahla Hosseini Bai, Ying Teng,Zhihong Xu 期刊:Environmental Science and Pollution Research 影响因子:2.914 PMID:29860689