土壤谷氨酰胺酶(S-GLS) 活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法

产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
英文名称：Soil glutaminase (S-GLS) activity assay kit
产品商标：solarbio
注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC3970
规格：50T/24S
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：600
库存状态：现货
关键词：土壤谷氨酰胺酶|土壤谷氨酰胺酶活性检测|S-GLS|S-GLS活性检测
产品内容：
试剂一：液体30 mL×1 瓶，4 ℃保存；
试剂二：液体20 mL×1 瓶，4 ℃保存；
试剂三：液体5 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体8 mL×1 瓶，常温保存；
标准品：液体1mL×1 支，100μmol/mLNH4+，4℃保存。

产品说明：
S-GLS（EC3.5.1.2）存在于某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
S-GLS 催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。

试验需自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、50 目筛（或更小）、甲苯、冰和双蒸水。

操作步骤：
一、样品前处理：
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50 目筛。
二、标准曲线绘制：
取100μL 标准液加入900μL 蒸馏水中，制备10μmol/mL 标准溶液，然后稀释成0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL 的标准液。
三、测定步骤：
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在EP 管中加入下列试剂）
试剂名称         测定管          对照管           标准管               空白管
土样（g）         0.1              0.1               -                    -
试剂一（μL）      550             550               -                    -
甲苯（μL）         10              10               -                    -
                     混匀后测定管常温静置10min，对照管沸水浴10min。
试剂二（μL）      400               -               -                    -
                          混匀，37℃水浴1 小时。
试剂二（μL）       -                400              -                    -
             充分混匀后沸水浴10min，8000 g 常温离心10 min；取上清液65μL 与585μL 蒸馏水混匀即将上清液稀释10 倍，在EP 管中加入下列试剂
稀释上清液          650             650              -                   -
标准液               -                -            650                    -
试剂三              50               50            50                    50
试剂四              100              100          100                   100
蒸馏水              200             200           200                   850
         混匀，420nm 处读取吸光值A，尽快测完。分别记为A 测定管，A 对照管，A 标准管，A 空白管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

四、酶活性计算
1、标准曲线的绘制
以ΔA 标准管为y 轴，标准液浓度为x 轴绘制标准曲线，绘制标准曲线，测定标准方程为y=kx+b。将ΔA 测定带入方程，得到x（μmol/mL）
2、土壤谷氨酰胺酶活性计算：
单位定义：37℃下每g 土壤每天催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS（U/g 鲜重）＝x×V 反总×10÷W ÷T=230.4×x÷W。

V 反总:0.96mL；
T：反应时间，1/24d；
W：土壤质量，g；
10：稀释倍数。

注意事项：
1、当测定吸光值大于1 时，建议将上清液进一步稀释后测量。
2、离心后若上清液仍含有少量杂质，可将上清液再次8000g，常温离心10min 去除。
3、若测定管显色后有浑浊，可以将上清液稀释后测量。