土壤脂肪酶（S-LPS）活性检测试剂盒说明书
微量法

产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
英文名称：Soil lipase (S-LPS) activity test kit
产品商标：solarbio
货号: BC3985
规格:100T/48S
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：700
库存状态：现货 
关键词：土壤脂肪酶|土壤脂肪酶活性检测|S-LPS|活性检测|
产品简介：
脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。该酶在土壤生物动力学中具有重要的作用
LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS 活性。

产品内容：
试剂一：液体15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体5mL×1 瓶，室温保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体10mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：液体60μL×1 支。4℃保存。临用前加入1.97 mL 甲苯，即100μmol/mL 油酸。用前注意解冻溶解。
工作液的配制：将试剂三临用前加入16mL 蒸馏水于沸水浴中溶解，冷却至常温后加入4mL试剂二混合，高速震荡2 次，每次3min，间隔5min。4℃保存。也可根据该比例现用现配。

试验中所需的仪器和试剂：
台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板（非聚苯乙烯/聚丙烯结构）、可调式移液枪、甲苯、冰和蒸馏水、30 目筛（或更小）

操作步骤：
一、土样的处理：
新鲜土样自然风干，过30-50 目筛。
二、测定步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至710nm，甲苯调零。
2、标准溶液的稀释：将100 μmol/mL 的油酸标准溶液用甲苯稀释20 倍即为5μmol/mL 的标准溶液待测。
3、操作表：
取一1.5mLEP 管，加入下列试剂
加入试剂       对照管       测定管      标准管       空白管
土样（g）        0.03         0.03 -
甲苯（μL）        15          15 -
使土样充分润湿，常温放置10min。-
试剂一（μL）      150         150 -
工作液（μL）        -           150        -
37℃水浴反应1h，期间可震荡数次使土样和样品充分接触。之后沸水浴10min，冷却至室温。
-
工作液            150           -           -
甲苯（μL）        360          360          -
反复震荡混匀后，室温4000rpm 离心10 min -
取出离心管，小心吸取上层有机相0.3mL，加入另一1.5mL EP 管中，按下表操作：
上层溶液（μL）    300           300         -
标准品（μL）       -             -         300
甲苯（μL）                                              300
试剂四（μL）       75            75         75          75
反复充分震荡混匀；室温4000rpm 离心10 min，小心吸取有机相溶液200μL，加入微量玻璃比色皿/96 孔板中，于710nm 处测定吸光值。记为A 对照管，A 测定管，A 标准管，A 空白管，计算ΔA 测定= A 测定管-A 对照管，ΔA 标准= A 标准管-A 空白管。

LPS 活性计算：
活性单位定义：37℃中每g 土样每天水解橄榄油生成1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mg prot) =ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 甲苯÷T÷W= 43.2×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W。
V 甲苯：加入的甲苯体积，0.36mL；
C 标准：标准溶液浓度，5 μmol/mL ；
T：催化反应时间，1/24d；
W：样本鲜重，g。

注意事项：
1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。
2、实验过程中须远离火源。
3、当吸光度大于0.8 时，建议将样本稀释后测量（第二次加入甲苯的量增加）。
4、甲苯可溶解聚苯乙烯/聚丙烯材质。