谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)检测试剂盒 可见分光光度法 BC1190
  • 品牌:Solarbio
  • 产地:北京
  • 货号:BC1190
  • 价格: ¥询价
  • 发布日期: 2019-12-09
  • 更新日期: 2024-03-29
产品详请
产地 北京
品牌 Solarbio
货号 BC1190
纯度 %
规格 50管/24样


产品详细描述
产品内容
试剂一:液体×14℃保存。
试剂二:粉剂×14℃保存。
试剂三:液体×1-20℃保存。
 试剂四:液体×1瓶,4℃保存。
    工作液配制:临用前,试剂二中加入试剂一40 mL,充分震荡溶解后加入全部试剂三,混匀。(当天用完)
产品说明
谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应,生成氧化型谷胱甘肽GSSG,从而保护生物膜免受ROS的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护*、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
GSH-Px催化H2O2氧化GSH,产生GSSG;谷胱甘肽还原酶(GR)催化NADPH还原GSSG,再生GSH,同时NADPH氧化生成NADP+NADPH340 nm有特征吸收峰,而NADP+没有;可以通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
自备仪器和用品:
紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g试剂一体积(mL)15~10 的比例(建议称取0.1g 组织,加入1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。10000rpm4离心10min,取上清置冰上待测(如上清不清澈,再离心3min)

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量104个:试剂一体积(ml500~1000:1 的比例建议500 万细胞加入1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3 s,间隔7s,总时间3min)然后10000rpm4,离心10min,取上清置冰上待测(如上清不清澈,再离心3min)

  3. 血清等液体:直接测定。

二、GSH-Px测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 混合试剂在25℃或者37℃(哺乳动物)水浴中预热30min以上。
3. 空白管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、800μL预热的工作液,100μL试剂四,迅速混匀后于340nm处测定10 s处的吸光值,37℃水浴3min后迅速拿出测量吸光度,分别记为A1A2。计算A=A1-A2。(空白管只需做1~2个)
4. 测定管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL预热的工作液,100μL试剂四,迅速混匀后于340nm处测定10 s处的吸光值,37℃水浴3min后迅速拿出测量吸光度,分别记为A1A2计算A=A1-A2
三、GSH-Px活性计算:
1)按蛋白浓度计算
GSH-Px活力单位定义:一定温度下,每mg蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol NADPH氧化定义为一个酶活力单位。
GSH-Px (U/mg prot) =[ (A测定管-A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷[Cpr×V]÷T
             =536×(A测定管-A空白管)÷Cpr
2)按样本鲜重计算
GSH-Px活力单位定义:一定温度中,每g样品在反应体系中每分钟催化1μmol NADPH氧化定义为一个酶活力单位。
GSH-Px (U/g 鲜重)=[ (A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总×106] ÷(V÷V样总×W)÷T
            =536×(A测定管-A空白管)÷W
(3) 按细胞数量计算
GSH-Px 活力单位定义:一定温度中,每104个细胞每分钟催化1μmol NADPH 氧化定义为一个酶活力单位
GSH-Px (U/104 cell)=[(A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷(细胞数量×V ÷V样总)÷T
=536×(A 测定管-A 空白管细胞数量
(4) 按液体体积计算
GSH-Px 活力单位定义:一定温度中,每毫升液体每分钟催化1μmol NADPH 氧化定义为一个酶活力单位
GSH-Px (U/ml)=[(A 测定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷V ÷T
=536×(A 测定管-A 空白管)
A空白管=A1-A2A测定管=A1-A2
εNADPH摩尔消光系数6.22×103L/mol/cmd:比色皿光径,1 cmV反总:反应体系总体积,0.001 L1061 mol=1×106μmolCpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);V样:加入反应体系中上清液体积,100μL =0.1 mLT:反应时间,3 minW :样品质量,g
注意事项:
1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力;
2)混合试剂和底物液须临用前配制,配完后置于冰上;
3)测定过程操作须迅速;
4)细胞中GSH-Px活性测定时,细胞数目须在300-500万之间,细胞中GSH-Px的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。

相关文献:
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《Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L.) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model》 作者:Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,Jinsong Wu,Jianquan Kan 期刊:Journal of Functional Foods 影响因子:3.197 PMID:
《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影响因子:3.547 PMID:28189720
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448



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