辅酶ⅡNADP(H)含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

 BC1100

 50T/24S

酸性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；

碱性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：基质缓冲液 15mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 4mL 双蒸水，混匀；

试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 4mL 双蒸水，混匀；

试剂四：粉剂×1 支，4 ℃保存，用时加入 4mL 双蒸水，混匀；

试剂五：液体 1.8mL×1 支，4 ℃保存；

试剂六：液体 30mL×1 瓶，4 ℃保存；

试剂七：液体 50mL×1 瓶，4 ℃保存。

一、NADP 和 NADPH 的提取：

1、血清（浆）中 NADP 和 NADPH 的提取：

NADP 的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.9 mL 酸性提取液，煮沸 5min(盖紧)；冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min；取上清加入等体积碱性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

NADH 的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.9 mL 碱性提取液，煮沸 5min,冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min，取上清加入等体积酸性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

2、组织中 NADP 和 NADPH 的提取：

NADP 的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.9 mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧)，冰浴冷却后，10000g4℃离心 10min，取上清加入等体积碱性提取液混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

NADPH 的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.9 mL 碱性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧)，冰浴冷却后，10000g4℃离心 10min，取上清加入等体积酸性提取液混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

3、细胞或细菌中 NADP 和 NADPH 的提取：

NADP 的提取：收集 400-500 万细胞或细菌，加入 0.9 mL 酸性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，冰上保存待测。

NADH 的提取：收集 400-500 万细胞或细菌，加入 0.9 mL 碱性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，冰上保存待测

相关文献：

《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu， Pengsong Li，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影响因子:3.67 PMID:30673809