产品简介：  

1.           中文名：琼脂糖凝胶FF

2.           英文名：  DEAE Sepharose FF

3.           CAS＃：  69-78-3

4.           产品说明：平均颗粒大小：90μm；高流速：750cm/h;下游初步纯化介质，高流速加上高载量，可快速纯化大量粗产品。

5.           储存条件：4-28℃

 产品性质：    DEAE-   琼脂糖凝胶   FF   是将二乙胺 基乙基键合在快流速琼脂糖凝胶上形成的一种弱阴离子交换介质。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

 产品用途：  

本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在   pH   工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备

 产品使用过程：  

1.   装柱

⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

   ⑵根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉   20%   乙醇，抽干，用初始缓冲液(按凝胶：缓冲液   =3   ：   1   的比例)配成匀浆。匀浆作脱气处理。

⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

⑷  用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

⑸ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的   1.33   倍的流速流过，使柱床稳定。用   2~3   倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2.   平衡

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和   pH   不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如   Tris    、   PBS   等。

3.   上样

⑴样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。

⑵一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

⑶介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和   pH   值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用   DEAE   介质时，推荐的   pH   值是大于目标产品等电点   1   个单位。

4.   洗脱

DEAE   介质可用增大盐浓度或减小   pH   值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。

5.   再生

一般用高盐浓度的缓冲液(含   1~2mol/L NaCl   )   洗或减小   pH   洗   10   倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗(   CIP   )   除去。

6.    在位清洗

⑴ 对于以离子键结合上去的蛋白，可以用   2M Nacl   去除。

⑵ 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用   1M NaOH    去除。

⑶ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用   4~10   倍柱体积的   70%   乙醇或   30%   异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

清洗完毕后，用至少   3   倍缓冲液平衡柱子。

7.   注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

8.   去热源

用   0.5M   的氢氧化钠 清洗柱子   5~6   小时或用   0.1M   的氢氧化钠   24   小时。或用以下方法步骤去除：

⑴    2   倍柱体积的   70%   乙醇

⑵    2   倍柱体积   50mM Tris-Hcl pH7.5

⑶    1   倍柱体积   4M   尿素

⑷    3   倍柱体积的   Tris   缓冲液   +0.1M Nacl

以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制

9.    消毒

用   0.5~1M NaOH   室温下洗   8~10   倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

10.   灭菌

置介质于高压灭菌锅中   120   ℃下   30   分钟。