酵母基因组DNA提取试剂盒

酵母基因组DNA提取试剂盒

酵母基因组   DNA  提取试剂盒说明书  

货号   ：    D1900

规格：    50T/ 100T

保存：  室温 (15 ℃ -25 ℃ )  干燥保存，复检期 12 个月， 2 ℃ -8 ℃ 保存时间更长。

产品简介：  

本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取酵母基因组 DNA 。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附 DNA ，可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA 可用于各种常规操作，包括酶切、  PCR 、文库构建、 Southern 杂交等实验。

操作步骤：  

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。  

1 、取酵母细胞 ( 不超过 5×10 ⁷  ce l1 s) ， 12000rpm 离心 1min ，尽量吸除上清。

2 、酵母细胞壁的破除：向酵母菌体中加入 470ul 山梨醇 Buffer 。充分悬浮菌体，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul β- 巯基乙醇，充分混匀。 30 ℃ 处理 1-2h ，期间可颠倒离心管混匀数次。

3 、 12000rpm 离心 lmin ，弃上清，收集沉淀。

4 、向沉淀中加入 200ul 溶液 A ，充分悬浮沉淀，向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A(10mg/ml) ，充分颠倒混匀，室温放置 10min 。

5 、加入 20ul 的蛋白酶 K(10mg/ml) ，充分颠倒混匀。 65℃ 水浴消化 15-30min ，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。

6 、加入 200ul 溶液 B ，再加入 200ul 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，室温放置 2min 。

7 、 12000rpm 离心 2min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8 、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液 ( 使用前请先检查是否己加入无水乙醇 ) 。 12000rpm 离心 1min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9 、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，  12000rpm 离心 l min ， 弃废液，将吸附柱放入收集管中。

10 、 12000rpm 离心 2min ，将吸附柱敞口置于室温或 50 ℃ 温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、 PCR 等。

11 、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65 ℃ 水浴预热的洗脱液，室温放置 5min ， 12000rpm 离心 l min 。

12 、离心所得洗脱液再加入吸附柱中， 12000rpm 离心 2 min ，即可得到高质量的基因组 DNA 。

注意事项：  

1 、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。

2 、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65 ℃ 水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。

3 、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。

4 、洗脱缓冲液的体积好不少于 50ul ，体积过小会影响回收效率；洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右 ( 可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围 ) ，  pH 值低于 7. 0 会降低洗脱效率。 DNA 产物应保存在 -20 ℃ ，以防 DNA 降解。

5  、    DNA  浓度及纯度检测：得到的基因组   DNA  片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。       回收得到的   DNA  片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。   DNA  应在   OD ₂₆₀  处有显著吸收峰，   OD ₂₆₀  值为   1.0  相当于大约   50μg/ml  双链   DNA  、   40μg/ml  单链   DNA  。   OD ₂₆₀ /0D ₂₈₀  比值应为   1.7-1.9  ，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为   pH  值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu，Xuewu Guo，Jun Lu，Xi Sun，Feng Li，Yefu Chen，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影响因子:2.275 PMID:23256925
《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影响因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong，Guanglu Wang，Cuiying Zhang，Haigang Tan，Xi Sun，Mingyue Wu，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影响因子:2.275 PMID:23597844

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