DH5α感受态细胞

DH5α 感受态细胞说明书 
货 号：C1100                    
规 格：10×100ul / 20×100ul 
保 存：-70℃保存，运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存至少一年，-70 ℃保存至少 6 个月。 
产品简介： 
本公司生产的DH5 α 感受态细胞是采用大肠杆菌DH5 α 菌株经特殊工艺制备得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19 质粒检测，转化效率可达 108，-70 ℃保存3-5 个月转化效率不发生改变。 基因型:   supE44 △lacU169 （φ80 lacZ△M15 ）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1 
特   点:  一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的产物可与pUC 载体编码的  β-半乳糖苷酶氨基端实现β 互补，可用于蓝白斑筛选。 
操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行） 
1 、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100ul 感受态细胞为例。 
2 、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30 分钟。 
3 、将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。 
4 、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的SOC 或LB培养基，37℃ 180rpm 振荡培养1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 
5 、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或LB平板，37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA总量较少，可取200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的*较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。 

1、DH5菌株

用途:*菌，用于分子*、质粒提取。

基因型:supE44△lacU169（?80lacZ△M15）

       hsdR17 recAl endAl gyrA19

       thi-1 relAl

特点:一种用于铺制与培养质粒平板和粘性平板的抑制型菌株.其?80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recAl和endAl的突变有利于*DNA的稳定和高纯度质粒的提取。

2、TOP10菌株

用途：*菌，用于分子*，质粒提取。

基因型：F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoRaraD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

特点：一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补，可用于蓝白斑筛选。该菌株适用于高效的DNA*和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

3、JM109菌株

用途：*菌，用于分子*。

基因型：recAl supE44 endAl hsdR17

       Gyr A96 relAl thiΔ(lac-proAB )

       F’[traD36 proAB+ lacZ△M15]

特点：一种支持带有琥珀突变的载体生长的重组缺陷的抑制型菌株，对转染的DNA有修饰作用而无限制作用。

4、BL21(DE3)菌株

用途：表达菌，可用于表达非毒性蛋白

基因型：hsdSgal (c I TS857indl Sam7 nin5 lacUV5-T7)

特点：该菌株用于高效表达*于含有T7噬菌体启动子的表达载体的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于噬菌体DE3区，该区整合于BL21染色体上

5、BL21(DE3)pLysS菌株

用途：表达菌，可表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型：F-, ompT hsd（rBB-mB-），gal，dcm（DE3, pLysS,Camr）

特点：pLysS菌株含有pLysS质粒，因此具有氯霉素抗性。pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。

注意事项：  
 1、感受态细胞应保存在-70 ℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。  
 2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。  
 3、转化时，转化效率与外源 DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。  
 4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/ 铺板DNA总量。  
 5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到低。 
相关产品： 
  I1020   IPTG 溶液 (50mg/ml) 
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相关文献：

《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者:Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影响因子:4.402 PMID:30711013

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