细菌基因组DNA提取试剂盒

目录号                              包装                              价格
  D1600-50                          50T                              300.00
  D1600-100                         100T                              560.00

细菌基因组   DNA  提取试剂盒说明书  

货号：   D1600

规格   ：   50T /  100T

保存：  室温 (15 ℃ -25 ℃ )  干燥保存，复检期 12 个月， 2 ℃ -8 ℃ 保存时间更长。

产品简介：  

本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取细菌基因组 DNA 。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附 DNA ，可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA 可用于各种常规操作，包括酶切、  PCR 、文库构建、 Southern 杂交等实验。

操作步骤：  

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。  

1 、取细菌培养液 1ml ， 12000rpm 离心 1min. ，尽量吸除上清。

2 、向菌体中加入 200ul 溶液 A ，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮（如果是革兰氏阳性菌，可在此步骤加入终浓度为 20mg/ml 的溶菌酶），向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml) ，充分颠倒混匀，室温放置 15-30min 。

3 、向管中加入 20ul 的蛋白酶 K(10mg/ml) ，充分混匀， 55 ℃消化 30-60min ，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。

4 、向管中加入 200ul 溶液 B ，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于 75 ℃放置 15-30min ，沉淀即会消失，不影响后续实验。如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致 DNA 的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。

5 、向管中加入 200ul 无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置 2min 。

6 、 12000rpm 离心 2min.  弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7 、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液 ( 使用前请先检查是否己加入无水乙醇 ) 。 12000rpm 离心 1min ，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8 、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，  12000rpm 离心 l min ， 弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9 、 12000rpm 离心 2min ，将吸附柱敞口置于室温或 5 0 ℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、 PCR 等。

10 、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 6 5 ℃水浴预热的洗脱液，室温放置 5min ， 12000rpm 离心 1min 。

11 、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置 2min  ， 12000rpm 离心 2 min ，即可得到高质量的细菌基因组 DNA 。

注意事项 :  

1 、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。

2 、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 6 5 ℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。

3 、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。

4 、洗脱缓冲液的体积好不少于 50ul ，体积过小会影响回收效率；洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右 ( 可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围 ) ，  pH 值低于 7. 0 会降低洗脱效率。 DNA 产物应保存在 -2 0 ℃，以防 DNA 降解。

5 、  DNA 浓度及纯度检测：得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA 应在 OD ₂₆₀ 处有显著吸收峰， OD ₂₆₀ 值为 1.0 相当于大约 50 μ g/ml 双链 DNA 、 40 μ g/ml 单链 DNA 。 OD ₂₆₀ /0D ₂₈₀ 比值应为 1.7-1.9 ，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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