单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒  

脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）活性测定试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

货号: BC0665

规格: 100T/48S

产品内容：

提取液：液体 110 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 20 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 3.5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四：液体 8 mL×1 瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂 10 mg×1 支，4℃避光保存。临用前加入 1 mL 蒸馏水，配制成 10 mg/mL 的标准溶液。

产品简介：

脱氢抗坏血酸还原酶（Dehydroascorbate reductase，DHAR）是植物体内一种重要的抗氧化酶，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化循环中促进抗坏血酸再生的关键酶。DHAR 在循环中利用抗坏血酸维持植物体内抗坏血酸的正常代谢水平，保护细胞组分抵御氧化损伤方面发挥着重要作用。DHAR 催化还原性谷胱甘肽（GSH）还原脱氢抗坏血酸（DHA）生成 AsA，GSH 能和 5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（DTNB）反应产生 2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。TNB 在波长 412 nm 处具有*光吸收。通过测定 GSH 的减少速率，计算 DHAR 活性。

自备仪器和用品：

研钵/匀浆器、冰、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液器和蒸馏水。 

操作步骤：

一、样品的处理

1. 组织：按照组织质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5-10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加提取液 1 mL），冰上充分研磨匀浆，8000 g，4℃ 离心 10 min，取上清液置于冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL 提取液），冰浴超声超声破碎细胞（功率 300w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3 min）；然后 8000 g，4℃，离心 10 min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接检测。

二、DHAR 测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。

2. 标准溶液的配制：将 10 mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0015625mg/mL 的标准溶液备用。

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