线粒体柠檬酸(MCA）含量测试盒

线粒体柠檬酸(MCA）含量测试盒的测定意义：

    CA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。
配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况，（3）乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

线粒体柠檬酸(MCA）含量测试盒的测定原理：

    CA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。

线粒体柠檬酸（MCA）含量检测试剂盒说明书 紫外分光光度法 

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。 

货号：BC2170 

规格：25T/24S 

产品内容： 

酸性提取液：液体 25 mL×1 瓶，4℃保存。 

碱性提取液：液体 25 mL×1 瓶，4℃保存。 

试剂一：液体 7.5mL×1 瓶，4℃保存。 

试剂二：液体 2.5mL×1 瓶，4℃保存。 

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 7.5mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保 存。

标准品：液体 1mL×1 支，10μmol/mL 柠檬酸标准液，4℃保存。 

产品说明： CA 是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成，其 含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。 CA 在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯 肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可 反应出 CA 的含量。 

自备仪器和用品： 紫外分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。 

操作步骤： 

一、线粒体中柠檬酸提取： 

1. 称约 0.05-0.1g 组织（建议称 0.1g 样本），加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃ 离心 5min，取上清至另一 EP 管中，11000g/min 4℃离心 10min，弃上清（取 300μL 该上清液和 300μL 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定）；

沉淀即线粒体，向沉淀中加入 0.5mL 酸 性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率 20%，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），取此 溶液 300μL 和 300μL 碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

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