深夜十一点，你盯着显微镜下只有零星绿色荧光的细胞陷入沉思：隔壁组随手一转就有80%+效率，我的细胞怎么集体「装死」？先别急着怪细胞，大概率你从选转染试剂的第一步就走岔了。
脂质体和PEI堪称转染界两大顶流，今天我们把二者拉到同一条跑道，从原理、选型到避坑逐条理清楚，看完少废三批细胞，多出漂亮数据。
01 /先看原理：两种"骗细胞"的方式
转染的本质就一句话：骗过细胞膜，把外源核酸顺利送进胞质。但两位顶流的招数完全不同。
阳离子脂质带着中性辅助脂质（如DOPE），靠静电吸附包裹核酸形成脂质纳米颗粒（LNP），依靠和细胞膜成分同源的磷脂结构，直接与细胞膜融合或通过细胞内吞作用进入，把核酸货物直接「卸」进胞质。 代表选手：Lipo 2000、Lipo3000、Lipo5000等。
带高密度正电荷的阳离子聚合物，把带负电的核酸静电缩合成正电性的复合物（polyplex），粘附到细胞膜上被内吞之后，靠独特的「质子海绵效应」—PEI不断缓冲内体酸化、大量吸附质子导致内体渗透压骤升肿胀破裂，把核酸货物直接「炸」出内体，完成逃逸。常用的是线性PEI 25000、PEI 40000。
一句话总结
脂质体靠"融"递送货，PEI靠"炸"逃内体。套路不同，玩法自然也不同。
02 /应用场景：谁是你的菜？
别迷信"万能转染试剂"，选型=细胞类型×货物（核酸）类型×实验规模，三个维度对号入座即可。
产品名称：Lip2000
应用场景：小规模、科研实验。
细胞类型：绝大多数贴壁细胞和悬浮细胞。
核酸类型：质粒DNA、siRNA/miRNA等小核酸。
推荐理由：转染界的"国民试剂"，文献引用率拉满，闭眼选都稳。
产品名称：Lip3000
应用场景：小规模、科研实验。
细胞类型：难转染细胞、原代细胞、干细胞、部分悬浮细胞。
核酸类型：质粒DNA、siRNA/miRNA等小核酸。
推荐理由：效率更高、用量更省、毒性更低，Lipo2000转不动的细胞，优先试它。
产品名称：Lipo5000
应用场景：小规模、科研实验。
细胞类型：贴壁细胞和悬浮细胞、原代细胞、难转染细胞
核酸类型：质粒DNA。
推荐理由：效率极高、毒性极低，配套有Trans Buffer，可完全替代无血清培养基，血管内皮细胞优选。
产品名称：Lipo9000质粒转染试剂
应用场景：小规模、科研实验。
细胞类型：贴壁细胞和悬浮细胞、原代细胞、难转染细胞
核酸类型：质粒DNA。
推荐理由：Lipo5000的升级款，毒性最低，效率最高，配套有Trans Buffer，可完全替代无血清培养基。
产品名称：Lipo5000 Prime DNA/siRNA/miRNA转染试剂
应用场景：小规模、科研实验。
细胞类型：贴壁细胞和悬浮细胞、难转染细胞。
核酸类型：质粒DNA、siRNA/miRNA等小核酸。
推荐理由：Lipo5000的升级款，毒性极低，效率极高，配套有Trans Buffer，可完全替代无血清培养基,可转染多种核酸分子。
产品名称：PEI MW 25000/PEI MW 40000/即用型 PEI MW 25000/即用型 PEI MW 40000
应用场景：小规模、科研实验、悬浮大规模瞬时表达（抗体/蛋白生产）病毒包装。
细胞类型：HEK293/CHO等好养的贴壁细胞和悬浮细胞。
核酸类型：质粒DNA(PEI 25000、PEI 40000)、常规siRNA/miRNA等小核酸(PEI 40000)。
推荐理由：成本低（粉末约为Lip2000的1/40）、无动物源、易工艺放大，摇瓶到反应器直接放大；瞬时表达效率轻松突破80%+；PEI MW 25000经典标准分子量，文献多，大量已发表体系可直接对标，选它最省心；PEI MW 40000比PEI MW 25000溶解性更好、转染效率更高；PQ0751、PQ0761为即用型，开瓶即用，无需自行配制。
备注：如果是原代神经元、免疫细胞等"难转染钉子户" ，尽量选择高效脂质体或专用试剂，也可以用电转等其他转染方式。
一句话总结
如果说脂质体是实验室精细实验的好帮手，PEI就是工业大规模生产的务实派。便宜、稳是其最大优势。
03 / 避坑指南：前人用细胞命换来的教训
坑1：细胞密度全凭随缘
转染时贴壁细胞汇合度建议70–90%，悬浮细胞密度维持在1–2×10?cells/mL，一定要选处于对数生长期的细胞，这才是效率与活力的平衡点。太稀→细胞长得慢、毒性相对大；太密→接触抑制、转染效率直接断崖式下跌。
坑2：质粒纯度不达标
一定要留意质粒DNA的大小、浓度和纯度。转染必须用无内毒素质粒，要求内毒素含量<0.1 EU/ug，A260/280比值在1.8-2.0，质粒超螺旋比例越高（>85%），转染效果越好。质粒建议≤8 kb，8 kb以上质粒的粒径和毒性都明显更差。
坑3：转染试剂和DNA的比例全靠蒙
N/P比是PEI转染的命门—太低包不住DNA，太高毒性爆表。质粒转染常用N/P =6–10起步摸索，如PEI:DNA=3:1，约相当于N/P比23；常用脂质体转染试剂:DNA质量比≈2:1–3:1，siRNA转染体系需要单独调整，脂质减半、核酸降至pmol级。
划重点：每个细胞系、每款转染试剂的最佳比例都需要自己通过预实验摸梯度，别直接照搬隔壁组的参数，适配性完全不一样。
坑4：核酸-试剂复合时加了双抗或血清
抗生素放大脂质毒性，血清破坏复合物形成。复合阶段请用无血清、无抗生素的无血清培养基或专用稀释液。复合物制备完成换回完全培养基即可。转染后4–6小时根据需要可换为含抗生素的完全培养基。
坑5：复合物放置过久再使用
复合物放置过程中颗粒会自发聚集沉降，转染效率直接跳水，所以复合物配制完成后请立刻使用，严格遵循说明书操作，别靠所谓的「肌肉记忆」偷懒。
坑6：PEI粉末买回来直接用
PEI粉末必须先配成1mg/mL母液，pH调至7.0，0.22μm滤膜除菌后分装冻存于-80℃，避免反复冻融。pH值不符合要求会直接导致PEI活性打折。
坑7：只看效率不看活力
评价转染效果必须同时报告两个指标：转染效率+细胞活力（可以用CCK-8或者Live-Dead法检测）。满板荧光但细胞半死不活，下游实验数据全是假的。
转染这件事，三分靠选对试剂，七分靠把控细节。细胞类型、密度、质粒纯度、N/P比、换液时机、对照设置等，每一个参数背后都是前人废掉的细胞和白板换回来的经验宝藏。快把这篇文章存进收藏夹，下次开转前花2分钟过一遍，少走弯路。选对合适的转染体系，你的Western blot从此条带清晰，qPCR从此得到漂亮的Ct值。
商品货号 | 商品名称 |
小核酸转染试剂（siRNA/miRNA） | |
贴壁细胞siRNA/miRNA小核酸转染试剂 | |
原代细胞siRNA/miRNA小核酸转染试剂 | |
悬浮细胞siRNA/miRNA小核酸转染试剂 | |
阳离子脂质体siRNA转染试剂（细胞株） | |
siRNA/miRNA贴壁细胞转染试剂V2（升级版） | |
siRNA/miRNA原代细胞转染试剂 V2（升级版） | |
siRNA/miRNA悬浮细胞转染试剂 V2（升级版） | |
Huvec siRNA/miRNA转染试剂（内皮细胞） | |
mRNA转染 | |
贴壁细胞mRNA转染试剂盒 | |
悬浮细胞mRNA转染试剂盒 | |
质粒DNA转染 | |
贴壁细胞质粒DNA转染试剂盒 | |
原代细胞质粒DNA转染试剂盒 | |
悬浮细胞质粒DNA转染试剂盒 | |
Huvec质粒DNA转染试剂套装 | |
KGN细胞质粒DNA转染试剂套装 | |
293细胞DNA转染试剂盒 | |
病毒包装质粒DNA转染试剂盒 | |
CHO细胞转染试剂(PEI) | |
293细胞悬浮化学转染试剂(PEI) | |
CHO和HEK293细胞转染稀释液(PEI) | |
CHO转染试剂与蛋白表达系统I（贴壁含血清培养） | |
CHO转染试剂与蛋白表达系统II（悬浮无血清培养） | |
DEAE-Dextran细胞瞬时转染试剂盒 | |
核酸转染（质粒DNA和mRNA、siRNA、miRNA mimics） | |
高效贴壁细胞核酸转染试剂盒(可用于含血清培养基) | |
高效原代细胞核酸转染试剂盒(可用于含血清培养基) | |
高效悬浮细胞核酸转染试剂盒(可用于含血清培养基) | |
高效核酸共转染试剂盒 （质粒DNA、siRNA或miRNA mimic） | |
蛋白转染试剂（蛋白、多肽和多糖） | |
贴壁细胞蛋白转染试剂 | |
原代细胞蛋白转染试剂 | |
悬浮细胞蛋白转染试剂 | |
其他 | |
DNA活体组织转染试剂 | |
悬浮细胞病毒感染增强试剂 | |
贴壁细胞病毒感染增强试剂 | |
聚凝胺(10mg/ml) DNA转染增强剂 | |
备注：转染试剂V2版本为小核酸转染试剂的升级版，含siRNA转染增强剂，转染阳性率可高达95%左右，比小核酸转染试剂高5-30%。
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