产品名称：多酚氧化酶测定试剂盒 （微量法）
产品英文名：Micro Polyphenol Oxidase (PPO) Assay Kit
产品货号：BC0195                          产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
产品规格：100管/48样                   产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：1000
库存状态：现货                          
关键字：多酚氧化酶测定试剂盒|微量法|

简要介绍：
PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在525nm有特征光吸收。
PPO（EC1.10.3.1）主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

产品详细描述

商品货号：	商品品牌：	规格	基本售价：	选择规格
BC0195-100管/48样	Solarbio	100管/48样	1000.00元

产品简介： 
PPO 主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元 酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。 PPO 能够催化邻苯二酚产生醌，后者在 410nm 有特征光吸收。

试验中所需的仪器和试剂： 
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 钵、冰和蒸馏水。

产品内容： 
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存，用前混匀即可；
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

操作步骤：  
一、粗酶液提取： 
1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声 波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10 分钟，取 上清，置冰上待测。
2、称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 410nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）  

充分混匀，5000g，常温离心 10min，收集上清，取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中，410nm 处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A 测定-A 对照。

PPO活性计算：  
a.用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下 
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每分钟每 mg 组织蛋白在反应体系中(300μL)使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个 酶活力单位。
PPO（U/mgprot）=提取液总体积（1000μL）÷样本体积（50μL）÷反应时间（10min）÷0.01×（A 测 定-A 对照）÷蛋白浓度（mg/mL）=200×ΔA÷蛋白浓度（mg/mL） 此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每分钟每 g 组织在反应体系中(300μL)使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力 单位。
PPO（U/g 鲜重）=提取液总体积（1000μL）÷样本体积（50μL）÷反应时间（10min）÷0.01×（A 测 定-A 对照）÷样本鲜重（g/mL）=200×ΔA÷样本鲜重（g/mL）
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每分钟每 1 万个细菌或细胞在反应体系中(300μL)使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为 一个酶活力单位。
PPO（U/104 cell）=提取液总体积（1000μL）÷样本体积（50μL）÷反应时间（10min）÷0.01×（A 测 定-A 对照）÷500=0.4×ΔA

b.用 96 孔板测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每分钟每 mg 组织蛋白在反应体系中(300μL)使 410nm 处吸光值变化 0.005 定义为一个 酶活力单位。
PPO（U/mgprot）=提取液总体积（1000μL）÷样本体积（50μL）÷反应时间（10min）÷0.005×（A 测定-A 对照）÷蛋白浓度（mg/mL）=400×ΔA÷蛋白浓度（mg/mL） 此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算： 
单位的定义：每分钟每 g 组织在反应体系中(300μL)使 410nm 处吸光值变化 0.005 定义为一个 酶活力单位。
PPO（U/g 鲜重）=提取液总体积（1000μL）÷样本体积（50μL）÷反应时间（10min）÷0.005×（A 测定-A 对照）÷样本鲜重（g/mL）=400×ΔA÷样本鲜重（g/mL）
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每分钟每 1 万个细菌或细胞在反应体系中(300μL)使 410nm 处吸光值变化 0.005 定义为 一个酶活力单位。
PPO（U/104 cell）=提取液总体积（1000μL）÷样本体积（50μL）÷反应时间（10min）÷0.005×（A 测定-A 对照）÷500=0.8×ΔA

注意事项： 
不同样本的多酚氧化酶*的反应温度略有差别，可在 25-37℃之间进行调节。