产品名称：乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒 微量法

产品英文名：  Micro Lacate Dehydrogenase（LDH）Assay Kit

产品货号：BC0685              产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼

产品规格：100管/48样                 产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：390
库存状态：现货                          
关键字：乳酸脱氢酶试剂盒|活性检测试剂盒|LDH活性检测|试剂盒|微量法

简要介绍：
LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙tong酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。
    LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙tong酸，丙tong酸进一步与2, 4 - 二硝基ben肼作用生成丙tong酸二硝基ben腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙tong酸浓度成正比。  

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶， 4℃保存；
试剂一：液体7 mL×1瓶， 4℃保存； 
试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3 mL双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20 ℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；
试剂三：液体7 mL×1瓶，4℃保存； 
试剂四：液体25 mL×1瓶，4℃保存；
丙tong酸钠标准液：液体1 mL×1支，4℃保存，2mmol/ml。
产品简介：
LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙tong酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD⁺/NADH之间互变。
LDH催化NAD⁺氧化乳酸生成丙tong酸，丙tong酸进一步与2, 4 - 二硝基ben肼作用生成丙tong酸二硝基ben腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙tong酸浓度成正比。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：   

1. 细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清（浆）样品：直接检测。

3. 丙tong酸钠标准液：取100ml标准液，倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml，用2、1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml做标准曲线。

二、测定操作表：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴15min

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min

充分混匀，室温静置3min，取200μL转移至微量石英比色皿或在96孔板中，450 nm下测定吸光度，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照。
根据标准管测定值和浓度做标准曲线，y为标准品浓度，μmol/mL；x为对吸光度。
LDH活力单位计算：

1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1. 标准条件下测定的回归曲线， y = 0.725x (x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为对吸光度)。

2. 血清（浆）LDH 活力的计算

单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙tong酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×10 3=92×ΔA

3. 细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算

1. 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙tong酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10 3 =92×ΔA÷Cpr 需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

2. 按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙tong酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/g 鲜重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10 3 =92×ΔA÷W （3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙tong酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/10 4 cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10 3 =0.184×ΔA÷W V1：加入反应体系中样本的体积，0.01 mL；V2：加入提取液的体积，1 mL； T：反应时间，15 min；Cpr： 蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g; 500：细胞或细菌总数，500 万。10 3：1μmol/mL=10 3nmol/mL。

2. 用 96 孔板测定的计算公式如下： 

1. 标准条件下测定的回归曲线， y = 0.3625x (x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为对吸光度)。

2. 血清（浆）LDH 活力的计算

单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙tong酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.3625÷T×10 3=184×ΔA

3. 细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算

1. 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙tong酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.3625×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10 3 =184×ΔA÷Cpr 需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

2. 按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙tong酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/g 鲜重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10 3 =184×ΔA÷W （3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙tong酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/10 4 cell）= [ΔA÷0.3625×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10 3 =0.368×ΔA÷W V1：加入反应体系中样本的体积，0.01 mL；V2：加入提取液的体积，1 mL； T：反应时间，15 min；Cpr： 蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g; 500：细胞或细菌总数，500 万。10 3：1μmol/mL=10 3nmol/mL。

相关文献：

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