产品名称：支原体检测试剂盒
 
货号：CA1080
 
保存：4℃保存，有效期为 2 年，Hoechst 工作液需要避光保存。
 
产品内容：
Hoechst 33258工作液     50ml
 
固定液            50ml
 
抗荧光衰减封片液        10ml
 
说明书              1 份
产品简介：
本试剂盒是利用荧光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）检测支原体污染。这种染料会结合到 DNA的 A-T 富
集区域，因为支原体的 DNA 中 A-T 含量高（55％～80％），所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的
细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体的 DNA染色斑，说明有支原体污染。
Hoechst 33258 的*激发波长为 346nm，*发射波长为 460nm；Hoechst 33258 和双链DNA结合后，*
激发波长为 352nm，*发射波长为 461nm。
 
 
操作步骤： 
贴壁细胞：
1、被检细胞接种于无菌的 6 孔细胞培养板中，接种密度为 1-2×104
。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。
2、5 天后，先吸去培养液，再加入 1ml 的固定液，静置 20min，
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置 15-20min 或室温静置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，加入 2ml 灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。
6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。 悬浮细胞：
1、收集需检测的细胞，1500rpm，5min。
2、将收集的细胞涂片于载玻片上，再加 1ml 的固定液，静置 20min。
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置 15～20min 或室温静置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，用无菌水洗涤玻片 3 次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。
6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
 
结果判断（参考）：
阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。
阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。
 
注意事项：
1．Hoechst工作液对人体有害，请注意防护。
2．固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。
3．支原体检测时，*用不含抗生素的培养液培养 2～3 代，这样容易避免假阴性结果。
4．本试剂盒用于 6 孔板检测时，可以进行 50 次检测反应。
5．检测支原体污染，可以使用支原体高效 Vero 细胞， 这样可以提高检测灵敏度，即将被检测样品接种于 Vero
细胞进行检测。
 
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