大鼠外周血单核细胞分离液试剂盒

品牌：Solarbio | 货号：P6700

产品用途：大鼠外周血单核细胞分离

操作步骤： 

1. 取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝血均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积 的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。 

2. 取一支无菌离心管，先加入试剂A，再加入试剂D，使两者形成梯度界面（试剂A：试剂D 的体积比为3：2，如稀释后的血液样本小于5ml，则先后加入3ml试剂A和2ml试剂D；如稀释 后的血液样本大于5ml，试剂总量与稀释后的血液样本量相等）， 两种试剂的分层一定要清晰。 

3. 将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面 清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺 于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。如 果样品较多，加样的时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉 属正常现象） 

4. 室温，水平转子500~800g，离心20~30min（血液的体积越大 所需的离心力越大，离心时间越长，*的分离条件需自行摸索， 离心转速*不超过1000g）。 

5. 离心后将出现明显的分层： 第一层为血浆层；第二层为白色 单核细胞层；第三层为透明试剂D液层；第四层为半透明试剂A液 层；第五层为红细胞层（如图示）。 

6. 小心吸取第二层白色单核细胞层到另一无菌的15ml离心管 中，加入10mL细胞洗涤液或PBS，颠倒混匀，250g，离心10min。 

7. 弃上清，5mL的细胞清洗液或PBS重悬细胞，250g，离心10min。 

8. 重复步骤7 

9. 弃上清，细胞重悬备用。 

10. 差异贴壁法纯化细胞：用单核细胞培养基以10 6个/ml的密度重悬细胞，将细胞铺于细胞板 或细胞瓶中，置于细胞培养箱中进行贴壁培养。 

1) 2~4 h内贴壁的为单核细胞。 

2) 10~24 h内贴壁的单个核细胞为内皮、内皮祖细胞、干细胞 。 

3) 不贴壁的为淋巴细胞。 根据不同细胞的贴壁时间存在差异，以达到简单纯化单核细胞的目的。此法成本低，操作简便。 如需获得高纯度的目的细胞则需选用免疫磁珠分选或者是应用流式技术分选细胞。

产品类目：

1.细胞培养试剂,2.Elisa试剂盒 3.蛋白质提取,4.蛋白质纯化,5.蛋白质定量,6.蛋白质电泳,7.蛋白质Marker,8.Western blot,9.免疫组化,10.抗体,11.SABC试剂盒,12.基因组和质粒提取试剂盒,13.核酸提取相关试剂,14.DNA电泳,15.DNA Marker,16.RNA相关试剂,17.PCR,18.Southern blot,19.基因工程,20.生物培养,21.碱基与核酸,22.氨基酸,23.多肽及蛋白质,24.酶,25.辅酶,26.酶抑制剂,27.维生素,28.抗生素,29.染色剂,30.糖与碳水化合物,31.生物缓冲液,32.植物生长激素,33.酸和盐分离效,34.胺,35.层析介质,36.常用生化试剂,37.其他生化试剂,38.耗材,39.标准品,40.细胞培养耗材